鹿茸抗氧化活性及其机理的研究.doc

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1、论文鹿茸抗氧化活性及其机理的研究申请人:学科(专业):药学指导教师:2021年6月网络教育学院毕 业 设 计 (论 文) 任 务 书专业班级 药学 层次 专升本 姓名 学号 一、毕业设计(论文)题目 鹿茸抗氧化活性及其机理的研究 二、毕业设计(论文)工作自 年 月 日起至 年 月 日止三、毕业设计(论文)基本要求: 指导教师: 网络教育学院毕业设计(论文)考核评议书指导教师评语:建议成绩: 指导教师签名: 年 月 日答辩小组意见:负责人签名 年 月 日答辩小组成员 毕业设计(论文)答辩委员会意见:负责人签名: 年 月 日摘 要论文题目: 鹿茸抗氧化活性及其机理的研究 学科(专业):药学申请人指。

2、导教师:摘 要鹿茸,是指雄性的梅花鹿未骨化还带有茸毛的幼角,含有生物碱基、对羟基苯甲醛等多种活性成分,具有很高的药用价值和食用价值。研究表明鹿茸能够抑制氧化损伤,起到延缓机体衰老的作用,但其抗氧化机理还没被揭示。本研究以秀丽隐杆线虫为模式生物,用四个不同浓度鹿茸处理线虫(1 g/mL、10 g/mL、100 g/mL、1000 g/mL),用胡桃醌对其进行氧化应激实验;通过检测抗氧化相关基因mRNA的表达量对鹿茸抗氧化的分子机制进行探讨;通过对鹿茸作用后线虫产卵量和运动能力的变化来探究鹿茸对线虫生存能力的影响。实验结果表明,鹿茸作用后的线虫相较于正常对照组都呈现出一定的抗氧化性能,其中100 。

3、g/mL表现出最佳的抗氧化活性。荧光定量PCR显示抗氧化的相关基因daf-16、gst-4、gst-7、sod-3表达量上调。综上表明,鹿茸可以提高线虫的抗氧化能力,提高了线虫的生存能力,可通过降低调控胰岛素/类胰岛素信号通路的传导来延长衰老。关 键 词:秀丽隐杆线虫;鹿茸;抗氧化;PCR技术论文类型:实验性研究目录目 录1 绪论51.1 鹿茸简介51.2 氧化应激损伤理论51.3 胰岛素/类胰岛素信号信号通路71.4 研究的目的和意义81.5 本文的选题思路和主要研究内容82 材料和方法102.1 材料102.2 实验试剂102.3 实验仪器102.4 实验方法112.4.1 制备大肠杆菌O。

4、P50菌液112.4.2 NGM培养基的制备112.4.3 线虫的保存122.4.4 线虫的复苏122.4.5 线虫氧化应激实验132.4.6 线虫RNA提取132.4.7 RT-PCR反应体系142.4.8 Q-PCR142.4.9 检测线虫产卵数152.4.10 检测线虫头部摆动频率和身体弯曲频率153 实验结果分析163.1 不同浓度鹿茸对秀丽隐杆线虫抗氧化能力的影响163.2 鹿茸对线虫体内相关抗氧化基因mRNA表达水平的影响163.2.1 RNA纯度和完整性的鉴定163.2.2 扩增片段的分析曲线173.2.3 实时荧光定量结果分析173.3 鹿茸对秀丽线虫生殖能力的影响183.4 。

5、鹿茸对线虫运动行为能力的影响193.5 讨论204 结论22致 谢23参考文献25声明西安交通大学网络教育学院论文1 绪论1.1 鹿茸简介梅花鹿属于世界上的珍缺动物,更被中国列为国家一级保护动物。我国东北地区生活有大量的梅花鹿,梅花鹿全身是宝,而其中雄性的梅花鹿未骨化还带有茸毛的幼角。鹿茸更是中药之王,补中上品1。早在2000多年前,人们就发现其好的药用性,有温和补肾、益血补气、强健身体等功效。明代医师李时珍在本草纲目中就有记载:“鹿茸,生精补髓,养血益阳,强筋健骨,治一切虚损,耳聋、目暗、眩晕、虚痢”。但那时鹿茸的活性成分还没被完全揭示。随着现代科学的发展,渐渐查明鹿茸中含有多种活性成分,包。

6、含有有机成分和无机成分。有机成分方面,鹿茸中富含四大营养物质多糖、磷脂、和葡萄糖、氨基酸等,这些是鹿茸发挥药物作用的主要物质基础。其中氨基酸占有机成分的一半,富含一些稀有的非必需氨基酸:赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸等。随着提取工艺的进一步发展,杨秀伟等2从马鹿茸的乙醚提取物中也分离出十种化合物,七种与上面的前七种相同,其余三种为胆固醇软脂酸酯、对羟基苯甲酸和对羟基苯甲醛。无机成分方面,主要包括Ca、Mg、Fe、Si、Na和K等无机元素。近年来,鹿茸提取物中含有微量元素成为一个新的热点。杨若明等3采用电感耦合等离子体原子发射光谱仪检测出鹿茸中含有K、Mg、P等3种宏量元素和Fe、M。

7、n、Zn、Cu等11种微量元素。董万超等4从鹿茸各部位均检测出26种无机元素,主要有Ca、Mg、Si、Na和K,其中一些微量元素如Co、Fe、Mn、Zn钴等在体内可以参与特定蛋白和生长激素的形成,在机体正常的生长发育和健康成长过程中发挥着必不可少的作用。研究发现了当鹿茸被锯断后,它会以每天12 cm的速度再次生长,并且不会留下疤痕。鹿茸展现的这种再生能力,引起了人们的高度重视,把对鹿茸的研究引向了抗氧化抗衰老领域。用鹿茸给四氯化碳中毒或由乙醇诱导的小鼠灌胃治疗,可以显著降低血液中丙二醛(MDA),增强超氧化物歧化酶氧化物(SOD)活性,提高其抗氧化能力,增加其生存能力,但对正常小鼠的SOD活性。

8、无显著影响5。在葛迎春等人6研究了。鹿茸提取物对人胚肺纤维细胞中琥珀酸脱氢酶(SDH)多糖(PSR)含量的影响,证实鹿茸提取物能显著增加年轻细胞中SDH和PSR的含量,提示其具有延缓抗氧化活性和抗衰衰老的作用。1.2 氧化应激损伤理论目前一个普遍被接受的理论是氧化应激损伤理论7。基于在物种生长过程中,外在环境和内部的遗传机制相互作用,导致内部基因的损伤。这种基因会不断积累,积累到一定程度就会在表观显示出来,如行走缓慢、皮肤松弛,即普遍意义上的衰老。而造成内部损伤最主要的就是氧化带来的损伤8,而外部环境在某种程度上讲,并不会发生大的变化了。而内部氧化损伤却能在一定程度上被修复,所以研究氧化应激损。

9、伤的内在作用机制,以及检测一定的药物来治疗减少这种损伤就变得十分有价值和意义。内部氧化损伤是源于细胞生长代谢过程之中,产生出了带电荷的氧化自由基,即活性氧(Reactive oxygen species,ROS)。这些自由的活性氧会攻击细胞核内的DNA,导致细胞遗传过程中转录翻译出现小的偏差,从而引起蛋白质、脂类的变化,打破了原有的稳态,从而导致衰老。活性氧的产生途径,随着研究的不断深入,现已经清楚的被揭示。第一的途径是细胞呼吸作用过程中,氧气会从外界进入体内参与生命代谢的过程,在这个循环的过程中有部分氧气会带有一定微小的电荷,经过一系列的串联反应会生成氧自由基、羟自由基9等。二个途径是主要在。

10、线粒体中产生,线粒体是细胞呼吸的主要场所。在线粒体中电子由辅酶Q10携带通过电子传递链过程中,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶发挥传递作用,产生活性氧。第三个途径是在脂质参与氧化过程中,脂氧合酶发挥转化作用后,会导致羟自由基。综上可以看出,发生ROS的主要场所是线粒体10。因此,关于线粒体的相关研究也推动了氧化损伤的进一步研究。现在的理论表明线粒体DNA在生长,发育过程起着重要的作用,因此能够保证线粒体DNA的完整性,遗传过程的正确性对机体有着重要的意义。一般来说,ROS的产生和清除在体内是呈现一个平衡的状态,而由外界变化和时间累积的氧化损伤,会产生多余的自由基攻击线粒体的DNA,导致G-T的碱。

11、基突变。从而造成使氧的电子传递链产生错误,引起呼吸作用的变化,同时损伤线粒体的内部结构,更进一步造成ROS的堆积。过多的ROS堆积后,就会作用于其他细胞器或生理过程,最终导致细胞的凋亡和死亡。当因损伤细胞的死亡数量打破正常的细胞轮回,死亡细胞数大于新生细胞数时,机体就会出现整体水平上的衰老,甚至死亡。所以,线粒体作为一定程度上的生命动力源头,其功能的正常运行,对于整个机体平衡是必不可少的。在现实意义,许多疾病的发生、发展其实和线粒体的功能异常有着千丝万缕的联系。根据最近的研究,线粒体可以选择性的自噬11,是面对异常的代谢过程和生命环境的危机时刻,线粒体进行的一种自救活动,可以将自身标记,作为一。

12、个靶体,吸引溶酶体的降解过程。可以消除异常的基因、氧自由基、错误表达的蛋白等,从而牺牲部分线粒体,保证机体整体水平上的酶含量正常,代谢过程完整。从而来调控生命过程,影响衰老。更有研究人员发现,年龄的增长,伴随有DNA的甲基化12水平的上升。经过进一步的研究发现,细胞核中遗传性DNA的甲基化修饰水平反映着衰老的进程,是衰老的一个指示表。而ROS的不平衡增长是细胞核DNA甲基化的一个刺激因素,同时还会引起组蛋白的修饰。推测ROS可以对细胞核水平上的DNA进行亲核攻击,来修饰DNA的表观表达。因此ROS的大量堆积是机体变化的起源,会刺激DNA的甲基化,会导致表观遗传机制的改变,从而影响机体的代谢。当。

13、面对外界风险时,没有能力去应对,从而导致自身的病变、衰老。总的来说,ROS担当的是一个传递者的身份,有属于自己的信号通路,去影响遗传水平和代谢水平。而反观ROS本身并不会导致机体发生问题,但其大量堆积就将会扰乱机体的平衡,导致病变。已存在一些证据表明ROS确实在衰老里起到了关键的作用。通过研究电离辐射对活细胞以及人们饮食和负荷工作都证明了这些自由基会导致某些特殊的疾病13。氧化损伤除了通过基因水平间接作用于蛋白质,导致机体出现异常外,还会通过蛋白酶体系14直接作用于蛋白质。在机体内,蛋白酶体系本来是用于清除不必要的蛋白质和有损伤的蛋白质,来维持机体的平衡。而在衰老的机体中,这种蛋白酶体系出现了。

14、自身的漏洞,无法有效的识别氧化蛋白等代谢的副产物,导致了副产物和代谢垃圾在体内堆积,形成聚集体和脂褐素,通常称为老年斑。生活中蛋白质的积累15会导致疾病的产生,最常见的就是蛋白堆积造成的帕金森综合征。机体蛋白质内部整体的平衡被打破可能是引发衰老的原因之一。机体内蛋白质是一个有机的整体,生成和降解都收到很好的调节,在正常的生命条件下是处于平衡的良好循环状态下的。在相对幼年的情况下,细胞内部会通过保证蛋白质的正确折叠来生成蛋白质,通过蛋白酶降解系统清除蛋白质16,来保证机体对蛋白质的需要和利用。而年龄的增加,其本质是机体内受到的氧化损伤的积累,使蛋白质在合成过程中无法合成所需的蛋白,同时又无法清除无用的蛋白质。造成了生命活动的主要承担者蛋白质的。

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